在食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定中，由于定量的對象是肉眼不可見的微米級微生物生命體，菌落總數(shù)測定結(jié)果一直存在著一定的不確定性，縱觀檢驗全部流程，其中稀釋的準確性、菌落識別的準確性以及無菌控制這幾個方面是產(chǎn)生誤差，進而引起結(jié)果不確定性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

為了提升菌落總數(shù)測定結(jié)果的準確性，《食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》GB4789.2從2016版到2022版著重加強這幾個方面的控制。
● 在液體樣品制備環(huán)節(jié)，增加了使用拍擊式均質(zhì)器制備1:10樣品勻液的實驗步驟；
● 在樣品稀釋環(huán)節(jié)，將吸管反復(fù)吹打混勻方式改為振蕩器振蕩混勻方式；
● 在菌落檢測環(huán)節(jié)，增加了菌落總數(shù)測試片的檢測方法；

稀釋的準確性

稀釋是菌落總數(shù)測定的重要環(huán)節(jié)，若因混勻程度不達到100%，則間接產(chǎn)生稀釋誤差，并且誤差隨稀釋倍數(shù)的增加而呈幾何級數(shù)增長。

拍擊式樣品稀釋方式是被驗證能夠達到良好的混勻度的實驗方式，所以2022版新國標將液體樣品的稀釋也要求采取拍擊式混勻操作；拍擊式混勻操作，可以有效地通過施加外界機械力而促進樣品與稀釋液之間的振動，從而達到快速而徹底的混勻，有效地避免或減少因未能充分混勻而產(chǎn)生的稀釋誤差。

瑞士iNLABTEC Serial UC連續(xù)梯度稀釋儀，采用拍擊式混勻方式，自動拍擊器可加強稀釋樣液的振動，僅需4秒即可達到100%的混勻度。

● 無需吸管吹打操作，符合GB4789.2-2022新國標的要求；

● 4秒拍擊式混勻方式，實現(xiàn)混勻的充分性與高效性；

● 使用無菌Tip頭、無菌稀釋袋、無菌開袋器，完全符合無菌控制要求。

菌落識別的準確性

瓊脂上的菌落是由肉眼不可見的細菌細胞或細胞團塊，經(jīng)培養(yǎng)后，分裂繁殖形成的肉眼可見的細菌團塊。因為細菌各類不同而菌落形態(tài)差異很大，故菌落識別至今尚未形成標準化的判定。

為了保證樣品中的細菌不受局限生長空間的拮抗作用影響，而采取傾注法制備樣品平皿。但菌落生長于瓊脂中，就增加了菌落識別的復(fù)雜度。如菌落粘連、菌落重疊、瓊脂氣泡等。

2022版新國標新增了菌落總數(shù)測試片的檢測方法，菌落總數(shù)測試片只需識別菌落產(chǎn)生的色斑即可判定菌落，有效地降低了瓊脂識別菌落的難度，亦為減少菌落識別誤差的解決方法，但菌落測試紙片上能夠形成顯色菌斑的細菌，只滿足能夠在測試紙片的培養(yǎng)基上生長，且能夠產(chǎn)生與底物的顯色反應(yīng)的細菌，目前尚無更全面的驗證數(shù)據(jù)，故整篇標準中關(guān)于測試紙片法只在6.2.2中一句帶過，并無詳盡指導(dǎo)與解釋。

Punmicro ICON全自動菌落計數(shù)儀創(chuàng)新引入人工智能技術(shù)，對于復(fù)雜的傾注法樣品平皿上的菌落具有客觀而精確的識別能力，可有效提升菌落計數(shù)結(jié)果的準確性。

● AI人工算法技術(shù)，可自主學(xué)習(xí)菌落判定規(guī)則，結(jié)合高分辨成像系統(tǒng)，可達到甚至超越人工計數(shù)水平，解決重疊菌落、粘連菌落、異形菌落等復(fù)雜菌落識別判定問題；

● 全皿計數(shù)，有效區(qū)分培養(yǎng)皿邊緣折光與反光，解決邊緣菌落自動識別計數(shù)問題；

● 一鍵計數(shù)，無需人工根據(jù)樣品狀況進行大量的參數(shù)設(shè)定，樣品直接計數(shù)，解決全自動菌落計數(shù)儀的實用性問題；

● 可進行菌落測試紙片分析，在高分辨成像系統(tǒng)的加持下，解決人工肉眼不易辨識的重合菌斑的識別；

● 可進行圖片與數(shù)據(jù)的全面記錄，并可定制數(shù)據(jù)統(tǒng)計運算與檢測報表格式。

無菌控制

無菌控制對于菌落總數(shù)測定是一項基礎(chǔ)而重要的要求，避免外源性污染與交叉污染直接關(guān)系到檢測數(shù)據(jù)的準確性。

2022版新國標關(guān)注到10倍系列稀釋的操作過程中，使用吸管反復(fù)吹打來實現(xiàn)混勻的操作存在著極大的外源污染的風(fēng)險，故改用振蕩器進行振蕩混勻。

但振蕩器對于稀釋體系的振動幅度遠不如反復(fù)吹打，若想達到100%混勻程度，唯一的方法就是延長振蕩時間，這種方式將顯著降低實驗操作的速度。